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本試劑盒可以檢測活細(xì)胞內(nèi)總的一氧化氮合成酶的活性。如果和特異性的一氧化氮合成酶抑制劑配合使用，也可以檢測不同類型的一氧化氮合成酶的活性。

本試劑盒提供了一種在生理條件下通過熒光檢測活細(xì)胞內(nèi)一氧化氮合成酶活性的方法，不需要使用傳統(tǒng)方法所需的放射性同位素。本試劑盒采用了可以穿透細(xì)胞膜的最新一代一氧化氮熒光檢測探針DAF-FM DA(3-amino,4-aminomethyl-2',7'-difluorescein, diacetate)，在提供充足的底物的條件下檢測細(xì)胞內(nèi)的一氧化氮合成酶可以催化產(chǎn)生的一氧化氮量，從而檢測出一氧化氮合成酶的活性。詳細(xì)的檢測原理參考圖1。采用一些一氧化氮合成酶的抑制劑則可以測定出特定類型的一氧化氮合成酶的活性。例如，采用iNOS抑制劑，未加iNOS抑制劑測定出來的酶活力減去加了iNOS抑制劑測定出來的酶活力就是iNOS的酶活力。

本試劑盒是目前為止世界上最先進(jìn)的一種一氧化氮合成酶檢測試劑盒。和Calbiochem等多年前就開始提供的一氧化氮合成酶檢測試劑盒相比無需使用同位素，和Sigma等最近推出的基于熒光的一氧化氮合成酶檢測試劑盒相比采用了最新一代的熒光探針甲醇報警器，靈敏度更高，特異性更好。本試劑盒的缺點是和其它熒光法一氧化氮合成酶檢測試劑盒一樣一氧化氮含量，僅能提供一氧化氮合成酶的相對活性。

本試劑盒和檢測細(xì)胞內(nèi)一氧化氮水平的不同之處在于提供了充足的底物L(fēng)-Arginine和一些可以穿透細(xì)胞膜的反應(yīng)輔助因子一氧化氮含量，確保一氧化氮合成酶的催化的一氧化氮合成不會受底物的量或輔助因子的量的限制，從而可以測定出細(xì)胞內(nèi)一氧化氮合成酶活力。

本試劑盒最適合用于貼壁的細(xì)胞或組織的一氧化氮合成酶的檢測，對懸浮細(xì)胞也可以進(jìn)行檢測。

試劑盒組份：

NOS檢測緩沖液(2X)————15ml

精氨酸溶液————————600μl

NADPH——————————2.3mg

DAF-FM DA(5mM)——————20μl

注意事項：

1. RPMI 1640等含有較高濃度硝酸鹽的培養(yǎng)液容易對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾有毒氣體報警器，請盡量避免。

2. 由于檢測過程中有還原反應(yīng)一氧化氮含量，凡是影響還原反應(yīng)的氧化或還原試劑要注意避免，例如常用的還原劑DTT和巰基乙醇。

3. DAF-FM DA在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

儲存條件：-20℃避光，有效期6個月。

相關(guān)搜索：一氧化氮合成酶檢測試劑盒(熒光法)，Nitric Oxide Synthase Assay Kit

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